保存菌种的办法有（）A、冻干B、快速深低温冰冻C、置特殊培养基在普通冰箱中保存D、以上均可

第1题：

第2题：

传统发酵工艺生产用菌种的维护和记录的保存要求不包括（）。

• A、菌种的贮存条件应当能够保持菌种生长能力达到要求水平，并防止污染
• B、菌种的使用和贮存条件应当有记录
• C、应当对菌种定期监控，以确定其适用性
• D、定期进行菌种鉴别

正确答案:D

第3题：

全国食用菌菌种暂行管理办法》中食用菌菌种包括哪些？

正确答案: 包括双孢蘑菇、香菇、侧耳、猴头菌、金针菇、草菇、黑木耳、银耳等人工栽培的食用菌的菌丝体（包括孢子）及其生长基质组成的繁殖材料。

第4题：

传统发酵工艺生产用菌种的维护和记录的保存要求有（）。

• A、只有生产操作人员方能进入菌种存放的场所
• B、菌种的贮存条件应当能够保持菌种生长能力达到要求水平，并防止污染
• C、菌种的使用和贮存条件应当有记录
• D、对菌种定期监控，以确定其适用性

正确答案:B,C,D

第5题：

试述保存菌种的常规方法？

正确答案: 斜面低温保藏法、液体石蜡覆盖保藏法、沙土管保藏法、悬液保藏法、真空冷冻保藏法低温保藏法和液氮超低温保藏法。

第6题：

对于需要临时保存的菌种，可采用什么方法？长期保存呢？

正确答案:对于需要临时保存的菌种，可采用斜面保藏。对于需要长期保存的菌种，可采用甘油管藏。

第7题：

第8题：

第9题：

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

第14题：

菌种保存方法及优缺点。

正确答案: 1.斜面低温保藏法
将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。保藏时间依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2—4个月，移种一次。酵母菌两个月，细菌最好每月移种一次。
此法为实验室和工厂菌种室常用的保藏法，优点是操作简单，使用方便，不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等。缺点是容易变异，因为培养基的物理、化学特性不是严格恒定的，屡次传代会使微生物的代谢改变，而影响微生物的性状；污染杂菌的机会亦较多。
2.液体石蜡保藏法
（1）将液体石蜡分装于三角烧瓶内，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，1.05kg/cm2>，121.3℃灭菌30分钟，然后放在40℃温箱中，使水汽蒸发掉，备用。
（2）将需要保藏的菌种，在最适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体或孢子。
（3）用灭菌吸管吸取灭菌的液体石蜡，注入已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1cm为准，使菌种与空气隔绝。
（4）将试管直立，置低温或室温下保存（有的微生物在室温下比冰箱中保存的时间还要长）。
此法实用而效果好。霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1—2年，一般无芽孢细菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很难保藏的脑膜炎球菌，在37℃温箱内，亦可保藏3个月之久。此法的优点是制作简单，不需特殊设备，且不需经常移种。缺点是保存时必须直立放置，所占位置较大，同时也不便携带。从液体石蜡下面取培养物移种后，接种环在火焰上烧灼时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅，应特别注意。
3.滤纸保藏法
（1）将滤纸剪成0.5×1.2cm的小条，装入0.6×8cm的安瓿管中，每管1—2张，塞以棉塞，1.05kg/cm2>，121.3℃灭菌30分钟。
（2）将需要保存的菌种，在适宜的斜面培养基上培养，使充分生长。
（3）取灭菌脱脂牛乳1—2ml滴加在灭菌培养皿或试管内，取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。
（4）用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。
（5）将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中，用真空泵抽气至干。
（6）将棉花塞入管内，用火焰按图Ⅶ-13熔封，保存于低温下。
（7）需要使用菌种，复活培养时，可将安瓿管口在火焰上烧热，滴一滴冷水在烧热的部位，使玻璃破裂，再用镊子敲掉口端的玻璃，待安瓿管开启后，取出滤纸，放入液体培养基内，置温箱中培养。细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏，前两者可保藏2年左右，有些丝状真菌甚至可保藏14—17年之久。此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要特殊设备。
4.沙土保藏法此法多用于能产生孢子的微生物如霉菌、放线菌，因此在抗生素工业生产中应用最广，效果亦好，可保存2年左右，但应用于营养细胞效果不佳。
5.液氮冷冻保藏法
（1）准备安瓿管用于液氮保藏的安瓿管，要求能耐受温度突然变化而不致破裂，因此，需要采用硼硅酸盐玻璃制造的安瓿管，安瓿管的大小通常使用75×10mm的，或能容1.2mm液体的。
（2）加保护剂与灭菌保存细菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的细胞时，则将空安瓿管塞上棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃灭菌15分钟：若作保存霉菌菌丝体用则需在安瓿管内预先加入保护剂如10％的甘油蒸馏水溶液或10％二甲亚砜蒸馏水溶液，加入量以能浸没以后加入的菌落圆块为限，而后再用1.05kg/cm2>，121.3℃灭菌15分钟。
（3）接入菌种将菌种用10％的甘油蒸馏水溶液制成菌悬液，装入已灭菌的安瓿管；霉菌菌丝体则可用灭菌打孔器，从平板内切取菌落圆块，放入含有保护剂的安瓿管内，然后用火焰熔封。浸入水中检查有无漏洞。
（4）冻结再将已封口的安瓿管以每分钟下降1℃的慢速冻结至-30℃。若细胞急剧冷冻，则在细胞内会形成冰的结晶，因而降低存活率。
（5）保藏经冻结至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷冻保藏器的小圆筒内，然后再将小圆筒放入液氮保藏器内。液氮保藏器内的气相为-150℃，液态氮内为-196℃。
（6）恢复培养保藏的菌种需要用时，将安瓿管取出，立即放入38—40℃的水浴中进行急剧解冻，直到全部融化为止。再打开安瓿管，将内容物移入适宜的培养基上培养。此法除适宜于一般微生物的保藏外，对一些用冷冻干燥法都难以保存的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞均可长期保藏，而且性状不变异。缺点是需要特殊设备。

第15题：

菌种的维护和记录的保存内容。

正确答案: （一）只有经授权的人员方能进入菌种存放的场所。
（二）菌种的贮存条件应当能够保持菌种生长能力达到要求水平，并防止污染。
（三）菌种的使用和贮存条件应当有记录。
（四）应当对菌种定期监控，以确定其适用性。
（五）必要时应当进行菌种鉴别。

第16题：

微生物菌种保存方法有哪些？

正确答案: （1）斜面低温保藏法；
（2）液体石蜡封存法；
（3）沙土管保存法；
（4）冷冻干燥保存法；
（5）超低温保藏法。

第17题：

为什么微生物菌种的保存很重要？简介菌种保藏的原理和方法。

正确答案:菌种是进行微生物学研究与应用的基础，是宝贵的生物资源，所以进行菌种的保存是重要和基本的微生物实验法。

第18题：

《中国医学微生物菌种保藏管理办法》依据（）将菌种分为四类。

• A、菌种的毒力
• B、菌种的危险程度
• C、菌种的传染性
• D、菌种致病的死亡率

正确答案:B

第19题：

第20题：

第21题：

第22题：

第23题：