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  • 第1题:

    简述亲和色谱的基本过程。


    正确答案: 把具有特异亲和力的一对分子的任何一方作为配基,在不伤害其生物功能情况下,与不溶性载体结合,使之固定化,装入色谱柱,然后把含有目的物质的混合液作为流动相,在有利于固定相配基和目的物质形成络合物的条件下进入色谱柱。目的物质被吸附,杂质直接流出。变换过柱溶液,使配基与其亲和物分离,获纯化的目的产物。

  • 第2题:

    亲和色谱的配基有哪些?


    正确答案: ①酶的抑制剂
    ②抗体
    ③A蛋白
    ④凝集素
    ⑤辅酶和磷酸腺苷
    ⑥色素配基
    ⑦过渡金属离子
    ⑧组氨酸
    ⑨肝素

  • 第3题:

    提高亲和色谱操作容量的方法有哪些?


    正确答案: (1)、引入间隔手臂;
    (2)、增加配体的取代程度;
    (3)、减少配体与基质的结合键。

  • 第4题:

    何谓亲和色层分离法?亲和力的本质是什么?亲和色层中常用的亲和关系有哪几种?


    正确答案: (1)利用生物分子间的这种特异性结合作用的原理进行生物物质分离纯化的技术称为亲和纯化技术(Affinitypurification)。亲和层析是利用偶联亲和配基的亲和吸附介质为固定相亲和吸附目标产物,使目标产物得到分离纯
    化的液相层析法。
    (2)亲和力的本质:
    1.静电作用:亲和作用分子对的结合部位上带有相反电荷时,产生静电引力。在中性pH下,蛋白质分子上酸性氨基酸残基可带负电荷,碱性氨基酸残基可带正电荷。此外N末端氨基酸的-氨基带正电,C末端氨基酸的羧基带负电。
    2.氢键:如果亲和作用分子对的一方分子中含有氧原子或氮原子,结合部位之间可以产生氢键作用,即形成O···H-O或O···H-N。氢键的产生与否受结合部位之间位置关系的严格制约。
    3.疏水性相互作用:如果亲和作用分子对的一方分子上含有芳香环或烃基链等疏水基,另一方的结合部位上也含有疏水区,则两者之间可发生疏水性相互作用。
    4.配位键:如果亲和作用分子对均与同一金属原子配位,则两者之间可通过金属配位键间接结合。
    5.弱共价键:弱共价键是指结合力较弱的可逆共价键。当亲和作用分子对之间满足形成弱共价键的条件时可能形成弱共价键。
    具有亲和作用的分子对之间具有“钥匙”和“锁孔”的空间结构关系。
    (3)亲和色层中常用的亲和体系:
    特异性
    亲和作用体系高特异性
    抗原----单克隆抗体
    荷尔蒙----受体蛋白
    核酸----互补碱基链段、核酸结合蛋白
    酶----底物、产物、抑制剂群特异性
    免疫球蛋白----A蛋白、G蛋白
    酶----辅酶
    凝集素----糖、糖蛋白、细胞、细胞表面受体
    酶、蛋白质----肝素
    酶、蛋白质----活性色素(染料)
    酶、蛋白质----过度金属离子
    酶、蛋白质----氨基酸(组氨酸等)

  • 第5题:

    亲和膜色谱的缺点。


    正确答案: 从分离效率的角度,因膜的厚度(柱高)很小(一般为10~100μm).理论板数很低,吸附和清洗效率低。膜的污染和膜孔的堵塞使操作速度、吸附效率和亲和膜的寿命下降。

  • 第6题:

    亲和色谱法


    正确答案: 将相互间具有高度特异亲和性的二种物质之一作为固定相,利用与固定相不同程度的亲和性,使成分与杂质分离的色谱法

  • 第7题:

    亲和色谱的分离机制是什么?有何特点?


    正确答案: 传统的观念认为亲和色谱是基于配基-配体亲和反应的原理,利用色谱的差速迁移理论,实现对目标分子的分离,仅仅是一种组分分离的选择性过滤法。然而,这一理论是建立在配基-配体亲和作用是均相反应和宏观平衡态热力学的基础上的。但是,实际上目标分子在两相间分配系数过大,且在固定相上的吸附等温线多不呈线性。所以,关于生物大分子在亲和色谱中的保留机制及色谱过程数学模型的研究一直是一个相对薄弱的环节,有待进一步的完善.亲和色谱具有较高的专属性,经其分离,纯化,浓集后的生物样品具有较高的纯度,大大降低了后续测定(如HPLC.时的背景噪音,进而使得后续测定具有极高的灵敏度。

  • 第8题:

    问答题
    何谓亲和色层分离法?亲和力的本质是什么?亲和色层中常用的亲和关系有哪几种?

    正确答案: (1)利用生物分子间的这种特异性结合作用的原理进行生物物质分离纯化的技术称为亲和纯化技术(Affinitypurification)。亲和层析是利用偶联亲和配基的亲和吸附介质为固定相亲和吸附目标产物,使目标产物得到分离纯
    化的液相层析法。
    (2)亲和力的本质:
    1.静电作用:亲和作用分子对的结合部位上带有相反电荷时,产生静电引力。在中性pH下,蛋白质分子上酸性氨基酸残基可带负电荷,碱性氨基酸残基可带正电荷。此外N末端氨基酸的-氨基带正电,C末端氨基酸的羧基带负电。
    2.氢键:如果亲和作用分子对的一方分子中含有氧原子或氮原子,结合部位之间可以产生氢键作用,即形成O···H-O或O···H-N。氢键的产生与否受结合部位之间位置关系的严格制约。
    3.疏水性相互作用:如果亲和作用分子对的一方分子上含有芳香环或烃基链等疏水基,另一方的结合部位上也含有疏水区,则两者之间可发生疏水性相互作用。
    4.配位键:如果亲和作用分子对均与同一金属原子配位,则两者之间可通过金属配位键间接结合。
    5.弱共价键:弱共价键是指结合力较弱的可逆共价键。当亲和作用分子对之间满足形成弱共价键的条件时可能形成弱共价键。
    具有亲和作用的分子对之间具有“钥匙”和“锁孔”的空间结构关系。
    (3)亲和色层中常用的亲和体系:
    特异性
    亲和作用体系高特异性
    抗原----单克隆抗体
    荷尔蒙----受体蛋白
    核酸----互补碱基链段、核酸结合蛋白
    酶----底物、产物、抑制剂群特异性
    免疫球蛋白----A蛋白、G蛋白
    酶----辅酶
    凝集素----糖、糖蛋白、细胞、细胞表面受体
    酶、蛋白质----肝素
    酶、蛋白质----活性色素(染料)
    酶、蛋白质----过度金属离子
    酶、蛋白质----氨基酸(组氨酸等)
    解析: 暂无解析

  • 第9题:

    名词解释题
    亲和色谱

    正确答案: 利用亲和吸附剂作用分离纯化生物物质的液相色谱法。
    解析: 暂无解析

  • 第10题:

    问答题
    亲和膜色谱的缺点。

    正确答案: 从分离效率的角度,因膜的厚度(柱高)很小(一般为10~100μm).理论板数很低,吸附和清洗效率低。膜的污染和膜孔的堵塞使操作速度、吸附效率和亲和膜的寿命下降。
    解析: 暂无解析

  • 第11题:

    问答题
    亲和色谱中选择理想载体有什么特征?

    正确答案: 理想载体的特性:
    (1)不溶性;
    (2)渗透性,即具有疏松的网状结构,容许大分子自由通过;
    (3)高硬度及适当的颗粒形式,最好为均匀的珠状;
    (4)最低的吸附力;
    (5)较好的化学稳定性;
    (6)抗微生物和酶的侵蚀;
    (7)亲水性;
    (8)具有大量的供反应的化学基团,能与大量配基共价连接。
    解析: 暂无解析

  • 第12题:

    问答题
    亲和色谱的应用有哪些方面?

    正确答案: 1.t-PA的纯化—酶的抑制剂为亲和配基
    2.干扰素的纯化—免疫亲和色谱
    3.脱氢酶的纯化—色素亲和色谱
    4.淀粉酶抑制剂的纯化—固定化金属离子亲和色谱
    5.基因重组融合蛋白的纯化
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  • 第13题:

    除亲和色谱外,其他亲和分离技术有哪些?


    正确答案: 亲和错流过滤、亲和双水相分配、亲和反胶团萃取、亲和沉淀。

  • 第14题:

    亲和膜色谱的原理和特点。


    正确答案: 亲和配基固定在膜孔表面,流体在对流透过膜的过程中目标蛋白质与配基接触而被吸附。
    亲和膜色谱的优点
    无内扩散传质阻力,仅存在表面液膜传质能力,由于传质能力小,吸附速度快,达到吸附平衡所需时间短,配基利用率高;
    设备体积小,压降小,流速快,配基用量低;微孔膜介质种类多,价格便宜。

  • 第15题:

    亲和色谱的应用有哪些方面?


    正确答案: 1.t-PA的纯化—酶的抑制剂为亲和配基
    2.干扰素的纯化—免疫亲和色谱
    3.脱氢酶的纯化—色素亲和色谱
    4.淀粉酶抑制剂的纯化—固定化金属离子亲和色谱
    5.基因重组融合蛋白的纯化

  • 第16题:

    亲和色谱


    正确答案:是指利用生物分子与固定相表面的亲和配基所亲和力的差异而进行层析分析的方法。

  • 第17题:

    亲和色谱中选择理想载体有什么特征?


    正确答案: 理想载体的特性:
    (1)不溶性;
    (2)渗透性,即具有疏松的网状结构,容许大分子自由通过;
    (3)高硬度及适当的颗粒形式,最好为均匀的珠状;
    (4)最低的吸附力;
    (5)较好的化学稳定性;
    (6)抗微生物和酶的侵蚀;
    (7)亲水性;
    (8)具有大量的供反应的化学基团,能与大量配基共价连接。

  • 第18题:

    免疫亲和色谱


    正确答案: 一种用于分离、纯化抗原的色谱技术。即将抗体偶联到固相载体而制成免疫亲和层析柱,可对样品中能与抗体结合的特异性抗原分子进行分离、纯化。

  • 第19题:

    问答题
    亲和色谱的分离机制是什么?有何特点?

    正确答案: 传统的观念认为亲和色谱是基于配基-配体亲和反应的原理,利用色谱的差速迁移理论,实现对目标分子的分离,仅仅是一种组分分离的选择性过滤法。然而,这一理论是建立在配基-配体亲和作用是均相反应和宏观平衡态热力学的基础上的。但是,实际上目标分子在两相间分配系数过大,且在固定相上的吸附等温线多不呈线性。所以,关于生物大分子在亲和色谱中的保留机制及色谱过程数学模型的研究一直是一个相对薄弱的环节,有待进一步的完善.亲和色谱具有较高的专属性,经其分离,纯化,浓集后的生物样品具有较高的纯度,大大降低了后续测定(如HPLC.时的背景噪音,进而使得后续测定具有极高的灵敏度。
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  • 第20题:

    多选题
    色谱按分离原理分()。
    A

    吸附色谱

    B

    凝胶色谱

    C

    分配色谱

    D

    离子交换色谱

    E

    生物亲和色谱


    正确答案: E,C
    解析: 暂无解析

  • 第21题:

    问答题
    除亲和色谱外,其他亲和分离技术有哪些?

    正确答案: 亲和错流过滤、亲和双水相分配、亲和反胶团萃取、亲和沉淀。
    解析: 暂无解析

  • 第22题:

    问答题
    在亲和色谱中经常被采用的生物亲和关系有哪些?

    正确答案: ①酶:底物、底物类似物、抑制剂、辅酶、金属离子;
    ②抗体:抗原、病毒、细胞;
    ③激素、维生素:受体蛋白、载体蛋白;
    ④外源凝集素:多糖、糖蛋白、细胞表面受体蛋白、细胞;
    ⑤核酸:互补碱基链段、组蛋白、核酸聚合酶、核酸结合蛋白;
    ⑥细胞:细胞表面特异蛋白、外源凝集素。
    解析: 暂无解析

  • 第23题:

    问答题
    提高亲和色谱操作容量的方法有哪些?

    正确答案: (1)、引入间隔手臂;
    (2)、增加配体的取代程度;
    (3)、减少配体与基质的结合键。
    解析: 暂无解析